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      科研服務

      2019年08月02日 09:06   化工產品

      錸博(上海)生化科技有限公司 發布 訪問商鋪

      關鍵字:服務

      1. 基因克隆服務:

         基因克隆是指從樣本組織或細胞中抽提總RNA,反轉錄,設計合成特異性引物后,通過RT-PCR擴增獲得目的基因的DNA序列,獲得編碼全長蛋白質序列的DNA序列。根據特定序列設計特異性引物,通過PCR方法從組織或細胞中調取目的基因、克隆到 T 載體并進行測序。服務范圍包含TA克隆構建定向克隆構建基因3’RACE克隆基因5’RACE克隆等基因克隆服務

       

      2. 熒光定量PCR服務:

         熒光定量PCR是在常規PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現其定量功能的。其原理是隨著PCR反應的進行,PCR反應產物不斷累積,熒光信號強度也等比例增加,這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監測。熒光定量檢測根據所使用的標記物不同可分為熒光染料法和熒光探針法。熒光染料SYBR Green嵌入到雙鏈DNA分子后構象發生變化,能夠吸收497nm的激發光并發出520nm的熒光;而不摻入DNA雙鏈中的染料分子不會發射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加完全同步。TaqMan 熒光探針是在擴增時加入一個特異性的寡核苷酸熒光探針,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq 酶的 5'-3' 外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。服務內容包括:核酸定量分析、基因表達差異分析、甲基化檢測、SNP檢測、腫瘤基因檢測、藥物療效考核、產前診斷和病原體檢測等相關檢測分析。

       

      3. SNP檢測服務

      人類基因多態性既來源于基因組中重復序列拷貝數的不同,也來源于單拷貝序列的變異。其中單核苷酸多態性(single nucleotide polymorphisms,SNPs),目前倍受關注的一類多態性主要是指在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態性。它是人類可遺傳的變異中最常見的一種。占所有已知多態性的90%以上。我們將會按客戶要求靈活定制SNPs分型方案,提供多種技術平臺,滿足不同規模項目的需求。技術平臺主要有:測序分型:SNP分析的金標準,可發現未知SNP位點;但成本較高,工作量大周期長,不適合大樣本做疾病關聯分析。②PCR-RFLP分型:判斷依據酶切后產生片段的大小和數目的變化,技術簡便,價格便宜,僅使用已知SNP判斷,事宜少量樣本;但費時費力,靈敏度差,容易造成人工假相,使結果出現偏差。③Taqman 探針分型:適合已知SNP位點、位點數量少、通量高的檢測,結果直觀清晰,實驗閉管進行,因而減少了PCR污染的風險;但探針合成費用高,不能發現未知SNP位點。④飛行時間質譜(MALDI-TOF MS)分型:檢測速度快,理論上能分析單個堿基的變化;但純物理加成易受到樣本因素的多種干擾,精確度難以保證。全基因組分型芯片:起始樣品量要求很低,還能夠檢測多個感興趣的區域,從

      而檢出罕見的基因突變;價格昂貴。

       

      4. DNA甲基化檢測服務

      DNA甲基化是最早發現的基因表觀修飾方式之一,真核生物中的甲基化往往僅發生于胞嘧啶,即在DNA甲基化轉移酶(DNMTs)的作用下使CpG二核苷酸5'-端的胞嘧啶轉變為5'-甲基胞嘧啶。通常情況下,DNA甲基化能夠抑制基因的表達,而去甲基化則會誘導基因的重新活化和表達。通過這種DNA修飾方式可以在不改變基因序列前提下實現對基因表達的調控。人DNA的甲基化狀態與生長發育調控密切相關,比如抑癌基因通過增加CpG島以外的CpG序列非甲基化程度,而CpG島中的CpG則呈高度甲基化狀態,這樣將導致抑癌基因表達的下降,引起腫瘤的發生。甲基化檢測的研究應用:1. 尋找甲基化位點;2. 驗證甲基化位點,并進行甲基化程度分析;3. 分析甲基化位點與研究的相關性;4.啟動子甲基化檢測來驗證基因的表達量變化

       

      5. cDNA文庫構建服務

      SMART技術的出現是一個新的里程碑,這個稱作 Switching Mechanism At 5 end of the RNA Transcript(SMART),能使我們擴增得到的cDNA就是全長cDNA;同時結合本公司文庫均一化技術和消減文庫技術,特提供例如:普通cDNA文庫、SMART cDNA文庫均一化(NormalizedcDNA文庫、SMART 均一化cDNA文庫、SMART cDNA消減文庫等基因文庫構建服務。SMART cDNA文庫特點:1. 只需要少至25ngmRNA50ng的總RNA
      2. 采用Clontech SMART專利技術,全長比率高;3. 實驗周期短,最快23周即可完成整個文庫構建。SMART cDNA文庫應用:1.物種種質資源開發與保護;2.物種遺傳功能分析;3.基因克隆與表達;4.新基因發現;5.功能基因的篩選

       

      6. SSH文庫構建服務

         抑制性消減雜交文庫技術是一種集抑制消減雜交、基因文庫和斑點雜交等技術為一體的、突破性的差異表達基因高效篩選技術,與傳統的DD-PCRSAGEcDNARDA等技術相比,具有低豐度mRNA富集效率高、假陽性低、靈敏度高、重復性好等特點。本服務方法結合了抑制性PCR和消減雜交技術,同時融入我公司自主創新研發的基因文庫技術,經過體系不斷優化,建立起了一套快捷、有效的差異基因全長cDNA篩選的方法。技術特點:只需要0.5-2 μgpoly A RNA 或最低只需50 ngRNA 可以在物種遺傳信息未知情況下進行多樣本差異基因高通量篩選,尤其適用于非模式生物(植物\昆蟲\魚類等)研究 
      通量差異基因以克隆形式獲得保存,方便后續實驗研究(測序、RACE、引物設計等)應用領域:動、植物發育和分化研究動、植物抗藥性基因差異;組織(病理和正常)基因差異;疾病易感性差異研究微生物基因分型研究

       

      7. 噬菌體表面展示服務

         噬菌體展示技術主要原理以改構的噬菌體為載體,把待選基因片段定向插入噬菌體外殼蛋白質基因區,使外源多肽或蛋白質表達并展示于噬菌體表面,進而通過親和富集法表達有特異肽或蛋白質的噬菌體該技術作為篩選與多種靶分子 ( 如核酸、抗體、酶類、細胞表面受體等 ) 具有特異性親和力或活性的肽的一個有效方法自問世以來已取得了很大的發展 并被廣泛地應用于基因治療、基因疫苗研究、抗原表位研究、藥物篩選與設計、研究細胞信號傳導等領域。技術優勢:形成的融合蛋白表達在噬菌體顆粒的表面不影響和干擾噬菌體的生活周期,同時保持的外源基因天然構象能被相應的抗體或受體所識別② 外源多肽或蛋白質表達在噬菌體的表面而其編碼基因作為病毒基因組中的一部分可通過噬菌體的單鏈DNA測序推導出來該技術實現了基因型和表型的轉換。③與酵母雙雜交和雜交瘤細胞技術相比噬菌體展示系統在篩選蛋白質間相互作用和分泌抗體時更為簡便、高通量更適合于不能用酵母雙雜交研究的膜蛋白和轉錄因子并且無需了解被研究的蛋白質的結構,,在篩選過程中通過適當改變條件可以直接評價相互結合的特異性應用領域:DNARNA 結合蛋白的研究蛋白-蛋白相互作用的研究非蛋白分子與蛋白相互作用研究胞與蛋白相互作用的研究用于模擬表位的研究藥物篩選與導向抗體疫苗制備服務項目:1. 酵母展示文庫構建;2. 噬菌體展示文庫構建;3. 大腸桿菌展示文庫構建;4. 展示文庫淘選服務。

      8. 酵母雙雜服務

         酵母雙雜交系統是將待研究的兩種蛋白質的基因分別克隆到酵母表達質粒的轉錄激活因子(GAL4)DNA結合結構域基因,構建成融合表達載體,從表達產物分析兩種蛋白質相互作用的系統。同以往研究蛋白質—蛋白質之間相互作用的實驗手段相比,雙雜交系統具有其獨特優勢。首先,融合體蛋白之間的相互作用是在真核酵母細胞內進行,蛋白質有可能保持天然的折疊狀態,類似其在體內生理狀態下的情況,這是其他離體生化檢驗方法所缺乏的,因此較之后者,它所證實的蛋白質間相互作用將更接近于在體的真實水平。其次,雙雜交系統的敏感度即高,可以檢測到在蛋白質之間結合常數低至 1mmol/L 左右的微弱作用。許多微弱或短暫的蛋白質之間的相互作用可以借助報道基因表達過程中的多級放大效應反映出來;融合蛋白基因在強啟動子的作用下,處于較高的表達水平。第三,在篩選 cDNA 文庫時,雙雜交系統能夠簡捷地得到編碼相互作用蛋白的基因序列,它只需構建質粒而不必準備抗體或純化蛋白,省略了其它體外檢測蛋白之間相互作用方法所必須的蛋白抽提、純化等繁瑣步驟。酵母雙雜交系統的應用:1、高靈敏度地檢測蛋白-蛋白的交互作用;2、尋找在蛋白-蛋白交互作用中起關鍵作用的結構域或活性位點;3、尋找與靶蛋白相互作用的新蛋白;4、尋找具有藥物治療作用的小分子多肽;5、尋找調控蛋白質相互作用的化合物;6、繪制蛋白質相互作用圖譜

       

       


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